Orden de 13 de
Octubre de 1989, por la que se determinan los métodos de caracterización de
los residuos tóxicos y peligrosos
BOE 270, de 10-11-89
El Real Decreto 833/1988, de 20 de julio (RCL 1988\1659), por el que se aprobó
el Reglamento para la ejecución de la Ley 20/1986, de 14 de mayo (RCL
1986\1586), Básica de Residuos Tóxicos y Peligrosos, en su disposición final
faculta al Ministro de Obras Públicas y Urbanismo para dictar cuantas
disposiciones sean necesarias para el cumplimiento de lo establecido en el
citado Reglamento.
El anexo I de la norma reglamentaria, que lleva por título «Sistema de
Identificación de Residuos Tóxicos y Peligrosos», dispone que tal sistema de
identificación «consiste en la utilización de un conjunto de códigos al
objeto de poder disponer de una serie de informaciones que permitan en todo
momento, la identificación de los residuos». Los códigos señalados con
letras, figuran numerados en tablas y, utilizados en su conjunto, proporcionan
la forma de identificar los residuos facilitando el control de los mismos desde
que son producidos hasta su adecuado destino final.
La tabla correspondiente a cada código contiene un dato que es preciso
conocer para la adecuada identificación del residuo, que solamente tendrá la
consideración de tóxico y peligroso cuando en su identificación incluya el
dato de poseer un constituyente que le da el carácter de peligroso, señalado
con la letra C, distinto de «O», conjuntamente con alguna característica de
residuo peligroso, señalado con la letra H; que aparecen recogidos
respectivamente en las tablas 4 y 5.
La presente disposición tiene por objeto ofrecer métodos para determinar la
existencia o inexistencia de alguna de las características, cuya ausencia
excluiría al residuo de su conceptuación como peligroso; métodos regulados en
la Directiva 84/449/CEE, de 25 de abril de 1984, por la que se adapta por
sectores al progreso técnico la Directiva 67/548/CEE, relativa a la aproximación
de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas en materia de
clasificación, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas, y que se
refieren a la determinación de la inflamabilidad, corrosividad, reactividad,
cualidad de cancerígeno, mutagénico o teratogénico y toxicidad; no determinándose
métodos para la averiguación de la explosividad, comburencia, irritabilidad y
nocividad, dada la evidencia de estas características tal como se definen en la
tabla 5 del anexo 1 del Reglamento.
En su virtud, y en uso de la autorización concedida en la disposición final
del Real Decreto 833/1988, de 20 de julio (RCL 1988\1659), dispongo:
Artículo único
Se aprueban como métodos de caracterización de los residuos tóxicos y
peligrosos los que figuran en el anexo a la presente Orden.
DISPOSICIÓN FINAL
La presente Orden entrará en vigor el día siguiente al de su publicación
en el «Boletín Oficial del Estado».
ANEXO
Métodos de caracterización de los residuos tóxicos y peligrosos
El punto 15 del epígrafe 2 del anexo 1 del Reglamento (RCL 1988\1659) para
la ejecución de la Ley 20/1986 (RCL 1986\1586), Básica de Residuos Tóxicos y
Peligrosos, define la necesidad de que un residuo debe incluir en su
identificación los códigos C, distinto de cero y H, conjuntamente, para su
consideración como tóxico y peligroso.
Por tanto, un residuo identificado por el código C quedará identificado
también por el código H y tendrá la consideración de tóxico y peligroso si
cumple alguna de las siguientes condiciones:
1. Tener un punto de inflamación menor o igual a 55 °C, definido y
determinado según el método en vaso cerrado descrito en el punto A.9 punto de
inflamación de la Directiva de la Comisión de las Comunidades Europeas
84/449/CEE, que se recoge en el apéndice I de este anexo. Se entenderá que
dicho punto de inflamación se corresponde en su totalidad con el punto de
destello considerado en el punto 15 del epígrafe 2 del anexo 1 del Reglamento
para la ejecución de la Ley 20/1986, Básica de Residuos Tóxicos y Peligrosos.
2. Presentar alguna de las características de corrosividad siguientes:
a) Ser un residuo acuoso con pH menor o igual a 2 o mayor o igual a 12,5.
b) Ser un residuo líquido que corroe más de 6,35 milímetros de espesor
de acero por año a una temperatura de prueba de 55 °C.
c) Causar daños graves en los tejidos humanos por exposición durante un
tiempo no superior a quince minutos, por inhalación, o por contacto con la
piel y/o ojos.
3. Presentar alguna de las características de reactividad siguientes:
a) Ser normalmente inestable y experimentar fácilmente cambios violentos
sin detonación.
b) Reaccionar violentamente con el agua.
c) Formar mezclas potencialmente explosivas con el agua.
d) En contacto con el agua o con el aire húmedo desprender gases fácilmente
inflamables y/o tóxicos en cantidades peligrosas. La reactividad entre
residuo y agua e inflamabilidad se determinarán según el método de ensayo
descrito en el apéndice II de este anexo.
e) Contener sustancias como cianuros, sulfuros u otras que cuando está en
medios con pH comprendido entre 2 y 12,5 puede generar gases tóxicos.
f) Poder detonar o reaccionar explosivamente cuando se somete a una fuente
enérgica de iniciación o si se calienta bajo confinamiento.
g) Poder detonar o reaccionar explosivamente en condiciones normales de
presión y temperatura.
4. Contener un producto cancerígeno o probablemente cancerígeno, de acuerdo
con la IARC (International Agency for Research on Cancer) con una concentración
igual o superior al 0,01 por 100.
5. Sin perjuicio del punto anterior, se consideran como sustancias cancerígenas,
mutagénicas y teratogénicas las así definidas en el Real Decreto 2216/1985,
de 23 de octubre (RCL 1985\2804; RCL 1986\1452 y ApNDL 1975-85, 7501) por el que
se aprueba el Reglamento sobre declaración de sustancias nuevas y clasificación,
envasado y etiquetado de sustancias peligrosas el cual, en su anejo 3, relaciona
las sustancias que presentan riesgos específicos reseñados como que pueden
producir cáncer (referencia R45 del mismo anejo), pueden causar alteraciones
genéticas hereditarias (R46) o pueden causar malformaciones congénitas (R47).
Este listado de sustancias peligrosas tiene carácter abierto por lo que al
mismo se deben incorporar las especificaciones indicadas en las siguientes
normas de posterior publicación que, a su vez, completan la normativa básica,
definida como tal en el Real Decreto anteriormente señalado; estas normativas,
ambas del Ministerio de Relaciones con las Cortes y de la Secretaría del
Gobierno, son:
- Real Decreto 725/1988, de 3 de junio (RCL 1988\1509 y 1734), que modifica
el Real Decreto 2216/1985 (RCL 1985\2804; RCL 1986\1452 y ApNDL 1975-85,
7501).
- Orden de 7 de septiembre de 1988, por la que se actualizan los anejos técnicos
del mismo Real Decreto 2216/1985.
6. Presentar para rata una toxicidad DL50 para dosis oral igual o inferior a
200 mg/kg.; para conejo o rata una toxicidad DL50 por contacto con la piel para
una dosis de 400 mg/kg. o para rata una toxicidad CL50 por inhalación para una
dosis de 2 mg/1/4 horas.
7. Que los lixiviados obtenidos según algunos de los métodos de lixiviación
descritos en el apéndice III de este anexo presenten una CL50 a concentración
inferior o igual de 750 mg/l, o inferior o igual 3.000 mg/l, según los
bioensayos homologados descritos en el apéndice IV de este anexo.
En consecuencia, a efectos de su clasificación, si el productor de un
residuo identificado por el código C entiende que no es tóxico y peligroso
deberá demostrar que no reúne ninguna de las siete condiciones señaladas
anteriormente como de identificación del código H.
APÉNDICE I
Punto de inflamación
1. Método
1.1 Introducción
Es conveniente disponer de informaciones preliminares sobre la inflamabilidad
de la sustancia antes de proceder al ensayo. Este método es aplicable a las
sustancias líquidas, en su forma comercial, cuyos vapores pueden ser inflamados
por fuentes de ignición. Los métodos de ensayo descritos en el presente
documento sólo son válidos para los intervalos de punto de inflamación
especificados en cada uno de los métodos individuales.
1.2 Definiciones y unidades.
El punto de inflamación es la temperatura, corregida por una presión de
101,325 KPa, a la cual el líquido de ensayo desprende vapores en un recipiente
cerrado en las condiciones definidas en el método de ensayo y en unas
cantidades que produzcan una mezcla vapor/aire inflamable en dicho recipiente.
Unidad: °C
t = T - 273,15
(t en °C y T en K)
1.3 Sustancias de referencia
No es necesario utilizar sustancias de referencia cada vez que se examinan
nuevas sustancias. Su principal función es la de servir para calibrar periódicamente
el método y comparar los resultados cuando se aplique otro método distinto.
1.4 Criterios cualitativos.
1.4.1 Reproducibilidad.-La reproducibilidad depende del intervalo del punto
de inflamación y del método de ensayo utilizado: máximo ± 2 °C.
1.4.2 Sensibilidad.-La sensibilidad depende del método de ensayo
utilizado.
1.4.3 Especificidad.-La especificidad de ciertos métodos de ensayo se
limita a algunos intervalos de punto de inflamación y depende de las características
de la sustancia (por ejemplo, alta viscosidad).
1.5 Descripción del método.
1.5.1 Preparación.-Se coloca una muestra de la sustancia de ensayo en un
aparato de ensayo, de conformidad con los puntos 1.5.3.1 y/o 1.5.3.2.
1.5.2 Condiciones del ensayo.-Es preferible instalar el aparato lejos de
corrientes de aire.
1.5.3 Desarrollo del ensayo.
1.5.3.1 Método del equilibrio.-Ver normas ISO 1516, ISO 3680, ISO 1523 e
ISO 3679.
1.5.3.2 Método del no equilibrio.
Aparato Abel: Ver normas BS 2000, parte 170, NF M07-011 y NF T66-009.
Aparato Abel-Pensky: Ver normas (EN 57); DIN 51755, primera parte (para
temperaturas de 5º a 65 °C); DIN 51755, segunda parte (para temperaturas
inferiores a 5 °C), y NF M07-036.
Aparato Tag: Ver normas ASTM D-56 e ISO 2719.
Aparato Pensky-Martens: Ver normas ISO 2719, (EN 11), DIN 51758, ASTM 8013, ASTM
D 93, BS 200-34 y NF M07-019.
Observaciones: Cuando el punto de inflamación determinado por un método
basado en el no equilibrio (ver punto 1.5.3.2) tiene los siguientes valores: 0
± 2 °C, 21 ± 2 °C, 55 ± 2 °C, es conveniente confirmarlo mediante un método
basado en el equilibrio y utilizando el mismo aparato.
Únicamente se pueden utilizar para la notificación los métodos que puedan
dar la temperatura del punto de inflamación.
Para determinar el punto de inflamación de líquidos viscosos (pinturas,
gomas, etc.) que contengan disolventes, sólo se pueden utilizar los aparatos y
métodos de ensayo que permitan determinar el punto de inflamación de los líquidos
viscosos. Ver normas ISO 3679, ISO 3680, ISO 1523 y DIN 53213, parte primera.
2. Resultados
3. Informe
Se procurará incluir lo siguiente:
Descripción precisa de la sustancia.
Descripción del método utilizado.
Los resultados y cualquier otra información u observación que pueda ser útil
para la interpretación de los resultados.
APÉNDICE II
Inflamabilidad (sustancias y preparados que, en contacto con el agua o con el
aire húmedo, desprenden gases fácilmente inflamables en cantidades peligrosas)
1. Método
1.1 Introducción.
Este método de ensayo puede utilizarse para determinar si la reacción de
una sustancia con el agua ocasiona el desprendimiento de una cantidad peligrosa
de un gas o de varios gases, que pueden ser fácilmente inflamables o tóxicos.
Puede aplicarse tanto a sustancias sólidas como líquidas, pero no a las
sustancias que se inflaman espontáneamente en contacto con el aire.
1.2 Definición y unidades.
Fácilmente inflamables: Sustancias y preparados que, en contacto con el agua
o el aire húmedo, desprenden una cantidad peligrosa de gases fácilmente
inflamables, a una velocidad de, como mínimo, 1 l/Kg.h. Este límite no tiene
en cuenta la toxicidad del gas.
1.3 Principio del método.
El ensayo incluye varias fases que se describen a continuación; si la
inflamación se produce en cualquiera de estas fases no es necesario proseguir
el ensayo.
1.3.1 Fase 1: Colocar la sustancia de ensayo en una cubeta que contenga
agua destilada a 20 °C y observar si el gas desprendido se inflama o no.
1.3.2 Fase 2: Colocar la sustancia de ensayo en un papel filtro que flote
en un recipiente lleno de agua destilada a 20 °C y observar si el gas que se
desprende se inflama o no. El papel filtro sólo sirve para mantener la
sustancia en su lugar, lo cual aumenta las probabilidades de inflamación.
1.3.3 Fase 3: Formar con la sustancia de ensayo pilas de 2 centímetros de
altura y 3 centímetros de diámetro aproximadamente. Añadir algunas gotas de
agua a la pila y observar si el gas que se desprende se inflama o no.
1.3.4 Fase 4: Mezclar la sustancia de ensayo con agua destilada a 20 °C y
medir el caudal de gas durante siete horas, a intervalos de una hora. Si al
cabo de siete horas el caudal es variable o aumenta, debe prolongarse el
tiempo de medida hasta un máximo de cinco días. Si, a un momento dado, el
caudal supera 1 l/Kg.h., el ensayo puede darse por acabado.
1.4 Sustancia de referencia: No se especifica.
1.5 Criterios cualitativos: No se indican.
1.6 Descripción de los métodos.
1.6.1 Fase 1.
1.6.1.1 Condiciones del ensayo.-La sustancia de ensayo se utiliza en su
forma comercial y el ensayo se realiza a temperatura ambiente (alrededor de
20 °C).
1.6.1.2 Desarrollo del ensayo.-Colocar una pequeña cantidad
(aproximadamente unos 2 milímetros de diámetro) de la sustancia de ensayo
en una cubeta con agua destilada. Observar: i) Si hay desprendimiento de
gas, e ii) si el gas se inflama. Si se inflama se considerará que la
sustancia es peligrosa y se dará por finalizado el ensayo.
1.6.2 Fase 2.
1.6.2.1 Equipo.-Papel filtro, flotando sobre la superficie de agua
destilada en un recipiente adecuado, por ejemplo, una cubeta de 100 milímetros
de diámetro.
1.6.2.2 Condiciones del ensayo.-La sustancia de ensayo se utiliza en su
forma comercial y el ensayo se realiza a temperatura ambiente (alrededor de
20 °C).
1.6.2.3 Desarrollo del ensayo.-Colocar una pequeña cantidad de la
sustancia de ensayo (aproximadamente 2 milímetros de diámetro) en el
centro del papel de filtro. Observar: i) Si hay desprendimiento de gas, e
ii) si el gas se inflama. Si se inflama se considerará que la sustancia es
peligrosa y se dará por finalizado el ensayo.
1.6.3 Fase 3.
1.6.3.1 Condiciones del ensayo.-La sustancia de ensayo se utiliza en su
forma comercial y el ensayo se realiza a temperatura ambiente (alrededor de
20 °C).
1.6.3.2 Desarrollo del ensayo.-Formar con la sustancia de ensayo pilas de
2 centímetros de altura y 3 centímetros de diámetro, aproximadamente, con
un pequeño cráter en la cumbre. Añadir algunas gotas de agua en el hueco
y observar: i) Si hay desprendimiento de gas, ii) si el gas se inflama.
Si se inflama se considerará que la sustancia es peligrosa y se dará por
finalizado el ensayo.
1.6.4 Fase 4.
1.6.4.1 Equipo.-Deberá disponerse el equipo de acuerdo con la figura
siguiente, cuya estructura y funcionamiento serán los previstos en la norma
ISO 1773.
(Figura 1).Equipo
1.6.4.2 Condiciones del ensayo.-Asegurarse que el recipiente que contiene
la sustancia de ensayo está libre de partículas pulverulentas (< 500
um). Si éstas representan más del 1 por 100 en peso del total, o si la
muestra es quebradiza, reducir a polvo la sustancia antes de proceder al
ensayo con el fin de reducir la dimensión de las partículas durante el
almacenamiento; si no, la sustancia se utiliza en su forma comercial.
Realizar el ensayo a temperatura ambiente (20 °C) y a presión atmosféric
1.6.4.3 Desarrollo del ensayo.-Verter agua en el embudo con llave; después
extraer, pesar y colocar en un matraz cónico una cantidad suficiente de
sustancia hasta un peso máximo de 2,5 gramos, a fin de obtener un
desprendimiento de gas entre 100 y 250 centímetros cúbicos. Medir por
cualquier medio que sea apropiado el volumen de gas desprendido. Abrir la
llave del embudo para dejar pasar el agua al matraz; poner en marcha un cronómetro.
Registrar el tiempo que es necesario para que el gas se desprenda totalmente
y, si es posible, proceder a lecturas intermedias. El ensayo debe repetirse
tres veces.
Si no se conoce la identidad química del gas, debe analizarse. Si el gas
contiene componentes fácilmente inflamables y si, además, se ignora si el
conjunto de la mezcla es fácilmente inflamable, preparar y probar una mezcla de
la misma composición de conformidad con el método Inflamabilidad (Gas),
descrito al final de este módulo.
2. Resultados
Para que una sustancia de ensayo pueda considerarse peligrosa, es suficiente
que se haya observado una inflamación o un desprendimiento de gas fácilmente
inflamable a una velocidad superior a 1 l/Kg.h. en al menos tres ensayos.
3. Informe
Se procurará incluir lo siguiente:
- Indicación y descripción precisa de la sustancia tal y como se ha
recibido (por ejemplo color, dimensión de las partículas y estado físico).
- Cualquier preparación inicial de la sustancia de ensayo.
- Resultados de los ensayos.
- Identidad química del gas desprendido.
- La velocidad de formación del gas (1.6.4).
- Cualquier observación complementaria que sea útil para la interpretación
de los resultados.
Inflamabilidad (gas)
1. Método
1.1 Introducción.
El presente método permite determinar si gases mezclados con el aire a
temperatura y presión ambientes presentan un intervalo de inflamabilidad. Se
exponen mezclas que contengan concentraciones crecientes de gas de ensayo a una
chispa eléctrica y se observa si se produce la inflamación.
1.2 Definiciones y unidades.
El intervalo de inflamabilidad es el intervalo de concentración entre los límites
de explosión superior e inferior. Los límites de explosión superior e
inferior son las concentraciones en el aire de gas inflamable a las que el fuego
no se propaga.
1.3 Sustancia de referencia.
No se especifica.
1.4 Principio del método.
Se aumenta gradualmente la concentración del gas en el aire y en cada etapa
se expone la mezcla a una chispa eléctrica.
1.5 Criterios cualitativos.-No se indican.
1.6 Descripción del método.
1.6.1 Equipo.-El recipiente de ensayo es un cilindro de cristal de un diámetro
interior de al menos 50 milímetros y una altura de 300 milímetros, como mínimo,
que se dispone verticalmente. Los electrodos de ignición distan de 3 a 5 milímetros
uno de otro y están situados a 60 milímetros del fondo del cilindro. El
cilindro está equipado con una válvula. El aparato debe estar protegido por
un blindaje para limitar los daños de una posible explosión.
La fuente de ignición es una chispa inductiva alimentada durante un período
de 0,5 segundos producida por un transformador de alta tensión con una tensión
de salida de 10 a 15 kV (la potencia máxima es de 300 W).
1.6.2 Condiciones del ensayo.-El ensayo debe efectuarse a temperatura
ambiente
1.6.3 Desarrollo del ensayo.-Mediante bombas dosificadoras se llena el
cilindro de cristal con una mezcla de aire y gas de concentración conocida.
Hacer saltar una chispa en esta mezcla y observar si se desprende una llama de
la fuente de ignición y se propaga independientemente. Se irá aumentando la
concentración de gas en un 1 por 100 de volumen cada vez hasta que se
produzca la inflamación descrita anteriormente.
2. Resultados
La propagación de la llama constituye el único dato de información válido
para la determinación de esta propiedad.
3. Informe
Se procurará incluir lo siguiente:
La descripción precisa de la sustancia (identificación e impurezas).
Una descripción del aparato utilizado, mencionando las dimensiones.
La temperatura ambiente en el momento del ensayo
Las concentraciones de ensayo, así como los resultados obtenidos.
Los resultados del ensayo: Gas no inflamable o fácilmente inflamable.
Si se ha llegado a la conclusión de que no es inflamable, se debe
especificar claramente que se han probado todas las concentraciones, aumentando
cada vez la concentración en un 1 por 100 desde 0 a 100 por 100.
Cualquier información u observación que pueda ser útil para la
interpretación de los resultados.
APÉNDICE III
Métodos estándar de lixiviación
Los presentes métodos estándar de lixiviación tienen por objeto la
extracción de las sustancias solubles contenidas en un residuo sólido o
pastoso. Los lixiviados obtenidos permiten conocer, analíticamente, la
concentración de las sustancias tóxicas que contiene y la determinación de su
toxicidad mediante los bioensayos del apéndice IV.
A tal fin será admisible la utilización de cualquiera de los métodos de
lixiviación (método 1 o «EP» y método 2) descritos a continuación.
Método 1 o «EP»
1. Procedimiento de extracción
1.1 Se tomará una muestra representativa del residuo (100 gramos como mínimo)
por el procedimiento más adecuado, en correspondencia con su estado físico.
1.2 La muestra será separada en sus fases sólida y liquida de la siguiente
manera:
Se dispondrá de un filtro diseñado con un tamaño medio de poros de 0,45
micras y capaz de soportar una presión hidrostática de 5,3 kg/cm² (75 psi) de
la solución cuando está siendo filtrada.
Para soluciones que contienen sólidos donde la separación se puede hacer
sin imponer la presión diferencial de 5,3 kg/cm² pueden ser utilizados filtros
al vacío de 0,45 milímetros.
El procedimiento empleado, en una u otra forma, tiene por objeto separar la
parte de líquido libre de las partículas de residuo sólido de tamaño >
0,45 micras. Si la muestra no filtra pueden ser utilizadas otras técnicas de
separación para ayudar a la filtración.
La presión de filtración es empleada para aumentar la velocidad del proceso
de filtración, y no altera la naturaleza de la separación. Si el líquido no
se separa durante la filtración, el residuo puede ser centrifugado. Si la
separación se produce durante la centrifugación, la parte líquida
(centrifugada) es filtrada a través del filtro de 0,45 micras y se mezcla con
la fracción líquida del residuo obtenido en la filtración inicial.
Los materiales que no pasen a través del filtro después de la centrifugación
se considerarán residuos sólidos.
El porcentaje de sólidos será determinado secando el filtro a 80 °C hasta
alcanzar un peso invariable, entonces se calcula el porcentaje de sólidos
utilizando la siguiente ecuación:
Porcentaje de sólidos = [(peso del filtro + sólido) - (tasa peso del
filtro)]/peso inicial de la muestra x 100
El material sólido obtenido en el proceso anterior será evaluado por el
tamaño de sus partículas. Si tiene una superficie por gramo igual o mayor que
3,1 cm² o pasa a través del tamiz de malla 3,5 milímetros (0,375 pulgadas) el
operador procederá a realizar el punto 1.3.
Si la superficie es menor o el tamaño de las partículas mayor que el
especificado, el material sólido será preparado para extracción por trituración,
triturándolo hasta que pase a través del tamiz 9,5 milímetros (0, 375
pulgadas). Si el material constituye una sola pieza se somete al «procedimiento
de estructuras integrales», descrito más adelante en el apartado 2.
1.3 El material sólido obtenido en el punto 1.2 será pesado y colocado en
un agitador con 16 veces su peso en agua desionizada, no secándolo antes de su
pesada.
Para los fines de este método, un agitador aceptable es uno que proporcione
suficiente agitación a la mezcla no solamente para prevenir la sedimentación
de la muestra y extracción del fluido sino que también asegure que todas las
superficies de la muestra están en permanente contacto con el fluido.
1.4 Una vez colocados el material sólido y el agua desionizada en el
extractor, el operador comenzará la agitación y medirá el pH, de la solución
en el extractor. Si el pH de la solución es mayor de 5,0 será disminuido a 5,
0 ± 0,2, añadiendo ácido acético 0,5 N. Si el pH es igual o menor que 5,0 no
se añadirá ácido acético. El pH de la solución será controlado, tal como
se describe más abajo, en el curso de la extracción y si el pH se eleva por
encima de 5,2 se añadirá ácido acético 0,5 N, para rebajarlo a 5,0 ± 0,2.
Sin embargo en ningún momento se añadirán cantidades de ácido que excedan 4
ml por gramo de sólido.
La mezcla será agitada durante veinticuatro horas manteniéndola entre 20 °C
- 40 °C todo el tiempo, recomendándose que el operador utilice algún monitor
para el ajuste del pH. Cuando no se disponga de monitor se seguirá el siguiente
procedimiento:
a) Se calibrará un medidor de pH.
b) Se chequeará el pH de la solución y si es necesario se añadirá,
manualmente al extractor ácido acético 0,5 N hasta que el pH se ajuste a 5,0
± 0,2. El ajuste del pH se establecerá a intervalos de quince, treinta y
sesenta minutos, pasando al intervalo siguiente si el ajuste del pH es igual o
inferior a 0,5 unidades de pH.
c) El ajuste será continuo durante seis horas como mínimo.
d) Si al término de las veinticuatro horas de extracción el pH de la
solución no es inferior a 5,2 y la máxima cantidad de ácido (4 ml por gramo
de sólidos) no ha sido añadida, el pH será ajustado a 5,0 ± 0,2 y la
extracción continuará durante cuatro horas adicionales en las que será
ajustado a intervalos de una hora.
1.5 Al término de las veinticuatro horas del período de extracción se añadirá
agua desionizada en cantidad determinada por la siguiente ecuación:
V = 20W - 16W - A
Donde:
V = ml de agua desionizada a añadir.
A = ml de ácido acético 0,5 N añadidos durante la extracción.
W = peso en gramos de sólido cargado en el extractor.
1.6 El material del extractor será separado en sus fases sólida y líquida
en la forma descrita en el punto 1.2.
1.7 Los líquidos resultantes de los puntos 1.2 y 1.6 serán mezclados. Esta
mezcla de líquidos es el extracto que será utilizado para realizar los
bioensayos de toxicidad, pudiendo determinarse igualmente las concentraciones de
las sustancias tóxicas que contiene.
2. Procedimiento para estructuras integrales
Para preparar la muestra se utiliza un tester, consistente, en un aparato
dotado de un martillo de 3,18 centímetros de diámetro, que pesa 0,33
kilogramos y tiene caída libre de 15,24 centímetros, y un cilindro donde se
introduce la muestra.
La preparación se realiza introduciendo la muestra en el cilindro. Si la
muestra del residuo es un gran bloque monolítico se cortará una porción del
bloque de las siguientes dimensiones: 3,3 centímetros de diámetro por 7,1 centímetros
de altura del cilindro. Cuando la muestra de residuo está desmenuzada se puede
compactar para obtener un testigo de las mismas dimensiones y hacer el test.
Una vez colocada la muestra en el tester se dejará caer el martillo desde su
máxima altura 15 veces.
Terminada la operación el material de la muestra preparada se pesa y se
lleva al aparato de extracción para continuar el proceso 1, descrito
anteriormente.
Método 2
1. Toma y preparación de la muestra
Se tomará una muestra representativa del residuo, según los procedimientos
normalizados de toma de muestras.
Cuando la muestra presenta una fase líquida y otra sólida, las fases se
separarán por centrifugación o por filtración; se calcularán proporciones másicas
de cada fase con el fin de reconstruir una muestra representativa.
La granulometría de la muestra para el test de lixiviación será inferior a
4 milímetros, en caso contrario se procederá a la trituración de la parte
desechada por el tamiz de 4 milímetros. En caso de que dicha trituración no
pueda realizarse, el informe del ensayo tendrá que describir con precisión el
resultado de la muestra en el momento de su introducción en el recipiente de
lixiviación y su estado final después de la agitación.
2. Test de lixiviación
2.1 Forma de operar:
a) Primera extracción: Pesar exactamente en el recipiente de extracción,
previamente tarado, unos 100 gramos de residuo bruto a analizar (o el porcentaje
másico de cada residuo hasta formar 100 gramos).
Introducir una cantidad de agua destilada o desionizada igual a 16 veces la
cantidad de residuo que se ha puesto (por 100 gramos de residuo 1,6 litros de
agua). Si los análisis previstos necesitan más cantidad de lixiviados es
suficiente respetar las proporciones de 100 gramos de residuo bruto por cada 1,6
litros de agua destilada o desionizada. Colocar el recipiente en el aparato
agitador. Para este test es aceptable que se asegure que el líquido está en
contacto con toda el área superficial del sólido, evitando su estratificación.
Una vez comenzada la agitación se mide el pH de la solución. Si éste es
mayor de 4,5 se añade ácido acético 0,5 N hasta pH = 4,5 ± 0,1. Si el pH es
igual o inferior a 4,5 no es necesario añadir ácido acético.
Pasado el tiempo de extracción de veinticuatro horas, se ajusta el volumen
con agua destilada o desionizada de la siguiente forma:
V = 20W - 16W - A
Donde:
V = ml de agua destilada o desionizada para añadir.
W = peso en gramos de residuo bruto que se ha cargado en el recipiente.
A = ml de ácido acético añadidos durante la extracción.
Si son necesarios más de 4 ml de ácido 0,5 N por gramo de residuo bruto
para llegar a un pH = 4,5 ± 0,1, entonces se añaden solamente 4 ml de ácido
acético 0,5 N por gramo de residuo bruto y se realizan las veinticuatro horas
de extracción, sin adición posterior de ácido.
Pasado el tiempo de agitación, y después de treinta minutos de reposo,
pueden suceder los siguientes casos:
1. Aparición de un sobrenadante limpio.
2. Aparición de un sobrenadante turbio sin emulsión.
3. Aparición de un sobrenadante, conteniendo una o varias fases no
miscibles en agua.
4. No aparece sobrenadante.
Caso 1: El sobrenadante se filtra y el líquido obtenido se reserva para análisis.
Caso 2: Se filtra el sobrenadante; si, a pesar de ello, el filtrado no es
claro, es necesario centrifugar. Según sea dicho centrifugado se actúa como
sigue:
a) Centrifugado limpio: Análisis.
b) Centrifugado turbio: Realizar una extracción con cloroformo sobre el
residuo bruto.
Separar las fases y analizar eventualmente la fase orgánica. Secar la fase
no orgánica a 37 °C y hacer una extracción con agua del residuo obtenido.
Filtrar o centrifugar la solución y realizar los análisis. Cuando se den estos
resultados hay que explicar que han sido obtenidos por este método.
Caso 3: Cuando aparece un sobrenadante, conteniendo una fase no miscible en
el agua, pueden producirse dos casos:
a) Las fases se pueden separar por simple decantación o, eventualmente,
por centrifugación y la fase acuosa obtenida es limpia.
Se somete a análisis la fase acuosa.
La(s) fase(s) en agua se extrae(n) con cloroformo. Después de la separación
de la fase de cloroformo se procede según se ha indicado en el caso 2.
b) Las fases no son separables o la fase acuosa permanece turbia después
de la centrifugación. Se realiza una extracción con cloroformo sobre el
residuo bruto. Señalar en el informe que se ha utilizado este método.
Caso 4: En caso de que el sobrenadante no aparezca por simple decantación,
la mezcla residuo-solvente debe ser centrifugada. Según el aspecto de dicho
centrifugado se opera de la forma prescrita en el caso 2 o en el 3.
La filtración debe realizarse utilizando un filtro de 0,45 micrómetros y
una bomba de vacío. Después del filtrado se mide la conductividad, el pH y la
DQO.
En cualquiera de los casos hay que tener en cuenta la protección de la
muestra.
Segunda extracción: El residuo resultante de la primera lixiviación se
coloca en un recipiente y se realiza una nueva extracción análoga a la
precedente.
Explotación de los resultados: Una vez finalizada la segunda extracción se
comparan, para cada sustancia tóxica, las concentraciones medidas en las dos
extracciones. Se presentan tres casos:
1. La concentración medida en la segunda extracción es débil en relación
a la primera (inferior al 10 por 100). La concentración en sustancia soluble
contenida en el residuo viene dada por la suma de las concentraciones
encontradas después de las dos extracciones.
2. La concentración media en la segunda extracción tiene un valor
comprendido entre el 10 por 100 y el 70 por 100 del encontrado en la primera. Se
realiza entonces una tercera extracción y la concentración en sustancia
soluble contenida en el residuo viene dada por la suma de las concentraciones
encontradas después de las tres extracciones.
3. La concentración medida en la segunda extracción es grande en relación
a la primera (70 por 100). Se realizan posteriores extracciones o se analiza
sobre el residuo bruto la concentración total de la sustancia considerada.
Los líquidos resultantes de las distintas extracciones serán mezclados y
servirán para realizar los bioensayos de toxicidad.
Se mencionará en el informe a qué caso corresponde el extracto obtenido.
APÉNDICE IV
Bioensayos homologados
Los presentes bioensayos (luminiscencia, inhibición), a los que se refiere
el punto 7 de este anexo, sirven para determinar la toxicidad de los lixiviados
obtenidos según los métodos del apéndice III, pudiendo emplearse cualquiera
de dichos bioensayos según las especificaciones siguientes:
1. Bioensayo de luminiscencia
Este bioensayo corresponde al ensayo de luminiscencia de la bacteria
Photobacterium phosphoreum y de acuerdo con el mismo se considera que un residuo
es tóxico si los lixiviados presentan una EC50 (quince minutos, 15 °C)
inferior o igual a 3.000 mg/litro.
2. Bioensayo de inhibición
Este bioensayo corresponde al punto C.2 Toxicidad aguda en Dafnias de la
Directiva de la Comisión de las Comunidades Europeas 84/449/CEE sobre la
inhibición de la movilidad de la Daphnia magna straus (apéndice A) y de
conformidad con el mismo se considera que un residuo es tóxico si los
lixiviados presentan una CL50, inferior o igual a 750 mg/litro.
APÉNDICE A
C.2 Toxicidad aguda en Dafnias
1. Método
1.1 Introducción.
Es conveniente disponer, en la medida de lo posible, de una amplia información
sobre la hidrosolubilidad, la presión de vapor, la estabilidad química, las
constantes de disociación y la biodegradabilidad de la sustancia antes de
proceder al ensayo.
Al proyectar el ensayo y al interpretar los resultados deberá tenerse en
cuenta otro tipo de información suplementaria (por ejemplo, la fórmula
desarrollada, el grado de pureza, la naturaleza y el porcentaje de impurezas
significativas, la presencia y cantidad de aditivos y el coeficiente de reparto
n-octanol/agua).
1.2 Definiciones y unidades.
La exigencia de la Directiva relativa a la CL50 sobre la dafnia se cumple
mediante la determinación de la CE50 tal como se describe en el presente método
de ensayo.
En el presente ensayo, la toxicidad aguda viene expresada por la concentración
media efectiva (CE50) de inmovilización, es decir, la concentración (en valor
inicial) que inhibe la movilidad del 50 por 100 de las dafnias de un lote
sometido al ensayo durante un período de exposición de veinticuatro horas. La
CE50 a las cuarenta y ocho horas también puede determinarse, si es factible.
Las concentraciones de la sustancia de ensayo se expresan en peso por volumen
(mg/l) y, también, en peso por peso (partes por millón).
Inmovilización: Se consideran inmovilizados los organismos que son incapaces
de desplazarse durante los quince segundos siguientes a una ligera agitación
del recipiente.
Las concentraciones de la sustancia de ensayo se expresan en peso por peso
(partes por millón).
1.3 Sustancias de referencia.
Puede someterse a ensayo una sustancia de referencia para demostrar que, en
las condiciones experimentales de laboratorio, la sensibilidad de la cepa
utilizada no se ha modificado sensiblemente.
En condiciones de ensayo idénticas, para un intervalo de concentraciones
eficaces, concentraciones diferentes en sustancias de ensayo ejercen efectos
diferentes en la movilidad de las dafnias. En consecuencia, al final del ensayo,
a cada concentración corresponderá un porcentaje diferente de inmovilización
de las dafnias.
Las concentraciones que causan del cero al 100 por 100 de inmovilizaciones se
determinan directamente mediante la observación, mientras que la CE50 -
veinticuatro horas (así como la CE50 - cuarenta y ocho horas) se determina, si
es factible, por cálculo.
Para este método, se utilizará un sistema estático, sin renovar las
soluciones de ensayo durante el período de exposición.
1.4 Criterios cualitativos.
La inmovilización de los testigos, al final del ensayo, no debe exceder del
10 por 100.
La concentración en oxígeno al final del ensayo no debe ser inferior a 2
miligramos por litro.
Las dafnias no deberían ser arrastradas hacia la superficie del agua, al
menos en el testigo.
1.5 Descripción del método de ensayo.
1.5.1 Reactivos.
1.5.1.1 Soluciones de las sustancias de ensayo.-Las soluciones madre con
las concentraciones requeridas se preparan disolviendo la sustancia en el
agua desionizada o en el agua que responda a las condiciones establecidas en
el punto 1.5.1.2.
Las soluciones madre para las sustancias de baja hidrosolubilidad pueden
prepararse por dispersión ultrasónica o, si es necesario, utilizando
disolventes orgánicos, emulsificantes o dispersantes. Si se recurre a
dichas sustancias, las dafnias testigo deben ser expuestas a una concentración
de producto auxiliar igual a la concentración máxima de la sustancia de
ensayo. La concentración de dichos productos auxiliares no debe sobrepasar
los 0,1 gramos por litro.
Las concentraciones elegidas para el ensayo se preparan mediante disolución
de la solución madre. Si se procede a un ensayo con concentraciones
elevadas, la sustancia puede disolverse directamente en el agua de disolución.
El ensayo debe realizarse sin ajustar el pH. En caso de modificaciones
significativas del pH, es conveniente repetir el ensayo ajustando el pH y
registrar los resultados. En tal caso, el valor del pH de la solución patrón
debe adaptarse al valor del pH del agua de disolución, salvo que haya
razones concretas que lo impidan. Para ajustar el pH se usa,
preferentemente, CIH o NaOH. Este ajuste debe efectuarse de tal forma que no
se modifique sensiblemente la concentración de la sustancia de ensayo en la
solución madre. Si el ajuste provoca una reacción química o una
precipitación de la sustancia de ensayo deberá mencionarse en el informe.
1.5.1.2 Aguas para la cría y la disolución.-Para este ensayo puede
utilizarse cualquier tipo de agua natural o reconstituida que sea
conveniente para la cría de dafnias.
Para evitar tener que proceder a adaptaciones antes del ensayo, se recomienda
utilizar para la cría la misma agua que se utilizará en el ensayo.
1.5.2 Equipo.-Se utilizará material corriente de laboratorio. El material
que entre en contacto con las soluciones de ensayo deberá ser, preferentemente,
de cristal:
Aparato para medir el oxígeno (con microelectrodo o cualquier otro equipo
que sea conveniente para medir el oxígeno en muestras de pequeño volumen).
Aparato adecuado para el control de la temperatura.
pHmetro.
Aparato para determinar la dureza del agua.
1.5.3 Organismos de experimentación.-Daphnia magna o Daphnia pulex, con más
de seis horas y menos de veinticuatro horas al comienzo del ensayo, criada en
laboratorio, sin enfermedades y de origen conocido (cría, tratamientos previos,
etc.).
1.5.4 Procedimiento.-Antes de proceder al ensayo definitivo puede realizarse
un ensayo preliminar para obtener información sobre el intervalo de
concentraciones que hay que utilizar en el ensayo definitivo. Además de las
series de ensayos, debe efectuarse un ensayo testigo, realizado con los
productos auxiliares, pero en ausencia de la sustancia de ensayo.
Las dafnias se exponen a la sustancia de ensayo en las siguientes
condiciones,
Tiempo:
Al menos veinticuatro horas.
Número de organismos:
Al menos 20 organismos por concentración de ensayo, repartidos
preferentemente en lotes de 5 o en 2 lotes de 10.
Carga biológica:
Un mínimo de 2 mililitros de solución para cada organismo.
Concentración de ensayo:
La solución de ensayo debe prepararse inmediatamente antes de introducir a
las dafnias, preferentemente sin utilizar más disolvente que el agua. Al mismo
tiempo que el testigo, hay que someter al ensayo concentraciones que formen una
serie geométrica, con una relación 1.8 que permitan obtener 0 y 100 por 100 de
inmovilizaciones después de veinticuatro horas y una serie de inmovilizaciones
intermedias que permitan calcular la CE50 - veinticuatro horas.
Agua:
Ver punto 1.5.1.2.
Luz:
Es facultativo un fotoperíodo; se puede admitir la oscuridad completa.
Temperatura:
La temperatura de ensayo debe situarse entre 18 y 22 °C, pero debe ser
constante para cada ensayo con aproximación de ± 1 °C.
Aaeración:
No airear por burbujeo.
Alimento:
Ninguno.
Al final del ensayo deberá medirse el pH y la concentración en oxígeno de
los testigos y de todas las concentraciones de ensayo; el pH de las soluciones
no debería haberse modificado.
Las sustancias volátiles deben someterse a ensayo en recipientes llenos y
herméticamente cerrados, suficientemente grandes como para evitar la falta de
oxígeno.
Se observa las dafnias al menos después de veinticuatro horas de exposición
y de nuevo después de cuarenta y ocho loras, si se ha prolongado el ensayo.
2. Evaluación de los resultados
Registrar en papel log-Probit los porcentajes de inmovilización acumulados
en función de las concentraciones, después de una exposición mínima de
veinticuatro horas. Unir los puntos obtenidos y anotar la concentración
correspondiente al 50 por 100 de inmovilización.
Si los resultados lo permiten, puede estimarse la concentración media CE50 y
sus límites de confianza (p:0,05) utilizando un método clásico.
El valor de la CE50 debe redondearse a una o como máximo, dos cifras
significativas.
Si la pendiente de la curva es demasiado acentuada para poder calcular la
CE50 bastará con dar una estimación gráfica de dicho valor.
Cuando dos concentraciones consecutivas, en una relación de 1,8, sólo den 0
ó 100 por 100 de inmovilización, bastarán estos dos valores para indicar el
intervalo en que se sitúa la CE50
Si se comprueba que la estabilidad o la homogeneidad de la sustancia de
ensayo no puede mantenerse, será conveniente interpretar los resultados con
prudencia e indicarlo en el informe.
3. Informe
Se procurará incluir lo siguiente:
Información acerca del organismo sometido a ensayo (nombre científico,
especie, proveedor u origen, tratamiento previo eventual, método de cría,
incluida la cepa, naturaleza, cantidad y frecuencia de la alimentación).
El número de dafnias utilizado en cada concentración de ensayo.
Las concentraciones utilizadas y cualquier información disponible sobre la
estabilidad, en dichas concentraciones, de las sustancias de ensayo en la solución
de ensayo.
La descripción de los recipientes utilizados en el ensayo: Volumen de la
solución contenida en cada uno de ellos, número de organismos.
Si se han realizado análisis químicos los métodos utilizados y los
resultados obtenidos.
El origen del agua de disolución y sus principales características
El método de preparación de las soluciones madre y de las soluciones de
ensayo.
Las concentraciones de cualquier producto auxiliar utilizado (disolventes orgánicos,
dispersantes, etc.).
Información acerca de la iluminación.
La concentración máxima aplicada que no haya provocado ninguna inmovilización
durante el período de ensayo.
La concentración mínima aplicada que haya provocado un 100 por 100 de
inmovilización durante el período de ensayo
Los porcentajes de inmovilización acumulados en el ensayo testigo, en el
ensayo testigo con producto auxiliar y en cada concentración de ensayo para los
períodos de observación recomendados (veinticuatro horas o veinticuatro y
cuarenta y ocho horas).
Los valores de CE50 para cada período de observación recomendado (con un límite
de confianza de 95 por 100, si es posible).
La representación gráfica de los porcentajes de inmovilización en función
de las concentraciones al final del ensayo.
Los métodos estadísticos utilizados para determinar los valores de la CE50.
La pendiente de la curva al cabo de veinticuatro horas y sus límites de
confianza de 95 por 100.
La concentración del oxígeno disuelto, los valores del pH y la temperatura
de las soluciones de ensayo.
Si se utiliza una sustancia de referencia, su nombre y los resultados
obtenidos.
Deberán respetarse los criterios cualitativos.
Agua reconstituida
Ejemplo de agua de disolución idónea.
Los productos químicos deben ser de calidad analítica.
El agua debe ser un agua destilada de buena calidad, o agua desionizada de
una conductividad inferior a 5 Scm-1.
Soluciones principales:
CL2Ca.2H2O (cloruro de calcio dihidratado): 11,76 gramos. Disolver en agua,
completar hasta el litro.
S04Mg.7H2O (sulfato de magnesio heptahidratado): 4,93 gramos. Disolver en
agua, completar hasta el litro.
C03HNa (carbonato ácido de sodio): 2,59 gramos. Disolver en agua, completar
hasta el litro.
ClK (cloruro de potasio): 0,23 gramos. Disolver en agua, completar hasta el
litro.
Agua de disolución reconstituida.
Mezclar 25 mililitros de cada una de las cuatro soluciones patrón y
completar, hasta un litro, con agua.
Airear hasta la saturación en oxígeno disuelto.
El pH debe ser de 7,9 ± 0,3.
Si es necesario, ajustarlo con NaOH (hidróxido de sodio) o ClH (ácido clorhídrico).
El agua de disolución así preparada se deja reposar durante unas doce horas
y no debe ser aireada posteriormente.
La suma de iones Ca/Mg en esta solución es igual a 2,5 mmol/l. La relación
de los iones Ca: Mg es de 4:1, la de los iones Na:K de 10:1. La alcalinidad
total de esta solución es igual a 0,8 mmol/l.
Las ocasionales desviaciones durante la preparación del agua de disolución
no deben modificar su composición o sus propiedades.
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